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手性衍生化-HPLC法测定D,L-构型!

发布日期:2019-07-25 15:34 浏览次数:

       “手性” ,是指一个物体与其镜像不重合。如图Fig.1中,当将双手平摊且手心向上时,我们可以发现左手和右手是对称的。然而,将左右手叠合,却始终不能重合在一起。可当将左手放在一面镜子前且手心正对着镜子时,我们能发现左手的像和右手能够重叠在一起。像这种互相成为“镜像”的关系,人们将之称为“手性”。

Fig.1
        有机化合物是含碳的化合物,手性碳原子的最外层有四个电子,能形成四个共价单键,因此当手性碳连接四个不相同的基团时,与这个碳相连接的四个基团将有两种空间连接方式,这两种连接方式互为“镜像”,不可能完全叠合。如图Fig.1中,α-氨基酸,在手性碳上连接了羧基、氨基、烃基和氢原子四个基团,当将其中三个基团重叠后,剩下的那个基团总是不能重叠在一起。由人体必需手性氨基酸组成的蛋白质与“手性”有密切相关,这也使得人体内的大多数酶具有专一性。因此,生命生理活动的许多现象与“手性”也密不可分。
        对于氨基酸异构体的分离和测定,现在运用最广泛的是高效液相色谱法,根据作用机理不同又包括 1.手性衍生化试剂(DIA, diastereomer formation); 2.手性固定相分离(CSP, chiral  stationary phases);3.手性流动相(CMP, chiral mobile phases)。其中手性固定相分离,色谱柱价格昂贵,部分固定相还存在稳定性差,柱容量低,柱强度差等确定,而采用手性流动相,系统平衡时间较长,添加剂消耗大,对于一些对映体分离效果差。
        我司采用采用邻苯二甲醛(OPA)+N-乙酰半胱氨酸(NAC)作为氨基手性衍生剂对D.L-丝氨酸进行分离和检测,原理如图Fig.2;

Fig.2


Fig.3
       如图Fig.3中,经过手性衍生剂衍生后的D,L-丝氨酸在C18柱上完成了分离检测,并且该方法对于实际样本也有非常好的适用性。
       我司采用手性衍生化试剂对D.L-构型氨基酸进行分离和检测,此方法可以使用非手性固定相,花费少,选取的手性衍生剂可以提高检测灵敏度,反应产物对热以及水有良好的稳定性,欢迎各位咨询。